ATIVIDADES ANTIMICROBIANA E POTENCIALIZADORA DE ANTIBIÓTICOS DA LECTINA DE Canavalia gladiata (LCG)
Agente antimicrobiano; Bomba de efluxo; Infecção oportunista; Resistência Bacteriana a Múltiplas Drogas; Pichia kudriavzevii.
As infecções fúngicas e bacterianas ganham destaque devido ao nível, cada vez mais alto, de resistência aos antibióticos, que esses microrganismos apresentam. Diante disso que a busca por novos alvos farmacológicos e substâncias antimicrobianas é uma necessidade. Entre essas substâncias referidas, a espécie Canavalia gladiata é uma leguminosa que, além de produzir metabólitos secundários, também sintetiza uma grande quantidade de lectinas, proteínas de ligação à carboidratos que possuem, dentre muitas funções, a de proteção antimicrobiana na planta. Desse modo, o objetivo desta tese foi avaliar o potencial antifúngico e antibacteriano de uma lectina de C. gladiata (LCG). A farinha fina das sementes de C. gladiata foi extraída em NaCl 0,15 M sob agitação constante por 4 horas. Após a centrifugação (4.000/4 °C/10 min), o sobrenadante foi submetido à cromatografia de afinidade (Sephadex G-50). O material foi dialisado e liofilizado. As cepas fúngicas utilizadas foram Candida albicans (CA INCQS 40006), Candida tropicalis (CT URM 4262) e Pichia kudriavzevii (PK INCQS 40095), já as cepas bacterianas foram Escherichia coli ATCC 10536 e Staphylococcus aureus ATCC 25923 padrões e S. aureus 10 e E. coli 06 multirresistentes, além de cepas de S. aureus portadoras de bombas de efluxo NorA (S. aureus 1199B) e MepA (S. aureus K2068). A concentração inibitória média (IC50), concentração fungicida mínima (FCM), concentração inibitória mínima (CIM) e a atividade combinada com os fluconazol (FCZ) foram determinadas usando o método de microdiluição em caldo, e a análise das transições morfológicas dos fungos foi realizada por subcultura em placas de Petri e câmaras úmidas. Os ensaios antibacterianos consistiram em determinar a concentração inibitória mínima e testar o efeito direto e combinado com antibióticos norfloxacino, ciprofloxacino, gentamicina e ampicilina, também pelo método de microdiluição. O FCZ reduziu o crescimento das leveduras nas três cepas testadas, com IC50 variando de 9,77 a 279,7 µg/mL. A LCG não apresentou atividade direta contra nenhuma das cepas fúngicas, no entanto, quando combinado com o fluconazol, mostrou inibição do crescimento nas concentrações de 1, 16 e 128 µg/mL para C. tropicalis, P. kudriavzevii e C. albicans, respectivamente. Entre as combinações de LCG+FCZ, a inibição mais significativa foi contra a cepa PK INCQS 40095, que apresentou uma inibição de 82,7%. O fluconazol inibiu completamente a transição morfológica em CT URM 4262. A LCG também teve um efeito contra essa cepa, embora tenha sido menos significativo, afetando parcialmente a morfologia (levedura/hifa). A LCG não apresentou efeito direto contra as bactérias analisadas, apresentando uma CIM ≥ 1024 µg/mL, entretanto reduziu a CIM dos antibióticos norfloxacino e ciprofloxacino frente a S. aureus 10 e S. aureus K2068 respectivamente, demonstrando um efeito combinado e potencializador dessas quinolonas. Os resultados da ampicilina+sulbactam nas cepas bacterianas multirresistentes sugerem a inibição da enzima β-lactamase, no entanto a LCG não apresentou resultados significativos. Nas duas cepas portadoras de bomba de efluxo houve redução da CIM por parte dos inibidores padrão, mas a combinação com a LCG não determinou a inibição das proteínas de efluxo. Portanto a LCG apresenta uma potencial atividade antimicrobiana nas cepas de fungos e bactérias analisadas, mas de forma indireta, ou seja, através da modificação da ação de antibióticos, potencializando o efeito antes não efetivo.